转染只是让DNA(或其他的分子)进入细胞,同时保持细胞的活力。我们可以用无数种方法做到这一点,分为三大类:基于试剂,基于仪器,基于生物。每种方法都有其优点和缺点,可用于瞬时或稳定转染。下文将进行简单介绍,看看哪一个最适合你。
CA磷酸盐
这种基于试剂的方法将DNA与氯化钙混合,以精确的方式添加到缓冲盐/磷酸盐溶液中,并使混合物在室温下静置。这会产生通过内吞作用或吞噬作用分离到培养细胞上的沉淀物。
优势:
便宜,效率高
弊端:
· 可重复性差
· 沉淀物的大小和质量对转染的成功至关重要
· 不适用于所有细胞类型
· 转染后残留的试剂会引起毒性
· 由于培养基中磷酸盐的高度集中,磷酸钙沉淀在 RPMI 中不起作用
· 效率受DNA分子大小的限制
基于脂质体的方法
这种基于试剂的方法通过中和其负电荷并使分子更适合穿过疏水性细胞膜来帮助细胞吸收核酸[1]。遗传物质通过脂质体转移到细胞中,这些是可以与细胞膜融合的囊泡。
优势:
能够将核酸递送至多种贴壁细胞系
在许多易于转染的细胞系中毒性低—细胞死亡很少
易于使用-步骤少
· 低成本
弊端:
对许多难以转染的、悬浮的和原代细胞类型无效,不适用于如细菌、酵母和植物细胞等具有细胞壁的细胞
敏感细胞系转染后残留试剂导致的毒性
随着时间的推移,实验的高耗材成本
试剂对存储条件敏感
效率受DNA分子大小的限制
病毒载体
这种基于生物学的方法使用病毒载体(如逆转录病毒、慢病毒、腺病毒或腺相关病毒)将核酸输送到细胞中。
优势:
高基因传递效率 (95-100%)
操作简单
弊端:
密集型病毒制备
病毒对存储条件敏感
某些病毒(如慢病毒)可导致宿主细胞基因组发生不必要的突变
生物安全问题增加--大多数病毒需要P2遏制(某些病毒可能很危险,应密切监测)
基因枪
这种基于仪器的转染方法使用氮气或氦气注入由 DNA 涂层颗粒制成的微小“子弹”,主要用于植物和体内动物应用。
优势:
消耗性成本随着时间的推移而节省
无论是否使用金粒子,都应用了变异性
弊端:
不适用于体外细胞
导致目标组织损伤
试验动物很容易被声音收到惊吓
高昂的启动成本
在准备样品时,程序多
电穿孔
这种基于仪器的方法使用电脉冲在细胞膜上形成通道,核酸等物质可以通过这些孔进入细胞[2]。
优势:
几乎很少改变靶细胞的生物结构或功能的非化学方法; 转染后无残留试剂,可以提高试剂敏感细胞类型的活力。
易于执行
高效、高活力
高的可重复性
可应用于多种细胞类型的体外和体内组织转染,可用于递送多种不同的转染分子或纳米颗粒
随着时间的推移,节省耗材成本
此方法的效率不受 DNA 分子大小的限制
弊端:
细胞死亡率(如果使用不理想的情况)
更高的启动成本
自从1938年BTX推出第一台商用电穿孔仪以来,BTX一直处于电穿孔技术的最前沿,一直致力于为各种细胞和组织类型提供完整的转染解决方案,包括真核生物,原核生物,体内组织,卵内,子宫内,贴壁和悬浮培养,植物细胞,皮肤和肌肉免疫。除电穿孔仪外,BTX还为各种应用提供和研发专业的电极。