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文章背景简介
BACKGROUND INTRODUCTION
结直肠癌(CRC)是全球范围内的第三大常见癌症,并且是癌症死亡的第四大原因。 尽管CRC的多模式疗法取得了很大进展,但大多数晚期CRC患者的预后较差。I期CRC患者的5年生存率> 90%; 然而,IV期CRC患者仅略高于10%。越来越多的报道显示,结直肠癌发生过程中涉及遗传和分子改变,包括基因突变,微卫星不稳定性和DNA高甲基化。因此,阐明CRC的分子机制对于为CRC提供更好的治疗策略至关重要。经典的Wnt信号通过调节细胞增殖,分化和细胞发育命运在维持肠内稳态中发挥着关键的作用。
Wnt信号传导的异常激活与人类癌症发生有关。 β-连环蛋白破坏复合物(APC,Axin2,CK1和GSK-3β)的突变或失调可以激活Wnt信号传导。此外,核β-连环蛋白(β-catenin)水平升高是侵袭性CRC的标志,它可以导致Wnt相关靶标(包括c-myc,cyclinD1,MMP2和MMP9等)的激活,从而促进细胞增殖、侵袭和迁移。 尾状相关同源盒转录因子2(CDX2)是一种肠特异性核转录因子,可以调节肠上皮细胞增殖和分化之间的平衡。 CDX2的激活能影响鼠肠上皮细胞分化和绒毛形态。最近,越来越多的证据表明,CDX2在各种人类恶性肿瘤(包括肝细胞癌,胰腺癌,肺癌和胃癌)中作为致癌基因或抑制因子发挥潜在作用。在人类CRC中,CDX2的减少与肿瘤分级,淋巴结转移,肿瘤分期和预后不良呈负相关。之前的研究表明:CDX2表达的恢复显著抑制了结肠癌细胞的侵袭性表型,包括活力、集落形成以及侵袭和迁移能力。此外,CDX2 +/-小鼠易患结肠肿瘤。最近有研究表明,在肺癌中,CDX2的过表达可以抑制β-catenin/ TCF活性和后续下游分子的活性。然而,CDX2在调节人CRC进展中的Wnt信号传导中的作用仍有待阐明。
2019年1月,来自西安交通大学第一附属医院综合外科的Junhui Yu等在《Cell Death & Disease》(IF=5.959,生物二区)杂志发表了题为”CDX2 inhibits the proliferation and tumor formation of colon cancer cells by suppressing Wnt/β-catenin signaling via transactivation of GSK-3β and Axin2 Expression”的文章。
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所用到的主要方法
METHODS
1.慢病毒载体及转染
2.MTT法
3.流式细胞仪术
4.裸鼠异种移植实验
5.实时荧光定量PCR
6.免疫组化
7.Western Blot
8.荧光素酶报告基因实验
9.CHIP-pcr
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文章主要内容摘要
ABSTRACT
尾状相关同源盒转录因子2(CDX 2)是一种肠特异性核转录因子,与多种肿瘤的发生密切相关。然而,CDX2在结直肠癌(CRC)发生发展中的作用尚不清楚。本研究表明,CDX2敲低后可以促进结肠癌细胞增殖(体外),促进肿瘤的形成(体内),并诱导细胞周期从G0 / G1转变为S期。而CDX2过表达则可以抑制细胞增殖。TOP/FOP-Flash报告基因实验表明:敲低或过表达CDX2能显著增加或降低Wnt信号传导活性。Western Blot实验结果表明:在CDX 2基因敲低或过表达的结肠癌细胞中,wnt信号通路的下游靶点(包括β-catenin、cyclinD 1和c-myc)的表达量表现为相应的上调和下调。此外,Wnt信号受其抑制剂XAV-939抑制之后,可以显著阻碍由于CDX2敲低而引起的细胞增殖,Wnt信号受其激活剂CHIR-99021激活之后,可以显著促进由于CDX2过表达而受抑制的细胞增殖。双荧光素酶报告基因和定量染色质免疫沉淀(qChIP)实验进一步证实CDX2通过直接结合糖原合成酶激酶-3(GSK-3β)的启动子和轴抑制蛋白2(Axin2)的上游激活子来激活GSK-3β和Axin2的表达。总之,本研究表明CDX2通过抑制Wnt /β--catenin信号通路来抑制结肠癌细胞的增殖和肿瘤的形成。
▼ 相关链接 ▼miR-145与Wnt通路在结肠癌中存在双向负调控模式
