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文章背景简介
BACKGROUND INTRODUCTION
细胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs)是参与细胞间和器官间的关键介质,它们来源于各种细胞，并可能在“母”细胞和受体细胞之间传递功能性细胞内容。目前，根据其大小、表面标记物和生物发生方式可分为三类：凋亡小体(Apoptosis bodies, ABs)、微囊泡(Microvesicles, MV)和外泌体(Exosomes, EXOs)。新出现的证据表明，外泌体（EXO）是治疗药物（如小RNA或DNA）递送的良好载体。EXO是由宿主细胞内源性产生的，可能是“自然的递送系统”，同时与外源性纳米颗粒相比，EXO引发的免疫反应或毒性更小。
小RNA，包括小干扰RNA(siRNA)和微RNA(miRNA)。siRNA是一种化学合成的短双链RNA(dsRNA)分子，长度为20-25bp。miRNAs是内源性编码的小的非编码RNA，是许多生物过程如增殖、分化、发育和细胞死亡的关键调节因子。siRNA和miRNA都可以与RNA诱导的沉默复合体(RISC)相互作用并激活它来诱导转录后基因沉默。这些小的抑制性RNA分子通过核酸内切酶Argonaute 2(AGO2)将活性RISC引导到目标mRNA，从而沉默指定的基因。最近，使用siRNA和/或miRNAs的治疗方法得到了广泛的研究，许多基于RNA的药物已经进入临床。
将治疗性siRNA或miRNA递送到其靶组织或细胞是一项具有挑战性的任务。吸入给药治疗药物是各种肺部疾病的重要治疗方法。吸入治疗药物的有效性与受体细胞、受体细胞对药物的摄取量以及药物分布动力学密切相关。此外，影响吸入药物疗效的重要因素还包括呼吸道几何形状、呼吸方式、气溶胶性质(如颗粒大小、形状、密度等)和纤毛粘液清除率等。但是，通过吸入或气管内滴注将siRNA或miRNA递送到肺部比常规药物更加困难，为了更加高效的将siRNA或miRNA递送到肺部，美国波士顿大学医学院Duo Zhang等人围绕如何使用宿主来源的EXO将吸入的小RNA分子递送到肺部，开展了相关研究，并于2018年在《Molecular Therapy》杂志（IF=12.4，Q1）发表了题为“Exosome-Mediated Small RNA Delivery:A Novel Therapeutic Approach for InflammatoryLung Responses”的文章。
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所用到的主要方法
METHODS
1、NTA粒径检测
2、扫描透射电镜
3、流式细胞术
4、小RNA负载EXO的制备
5、ELISA
6、免疫荧光和HE染色
7、Western blot
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文章主要内容摘要
ABSTRACT
外泌体(Exosome, EXO)是从活细胞中释放出来的一种细胞外纳米囊泡。越来越多的证据表明，EXOs参与了包括肺部疾病在内的人类疾病的发病机制。近年来，EXOs介导的药物传递潜力获得了越来越多的关注。本文主要研究了吸入EXOs是否可作为一种有效和实用的递送载体来激活或抑制肺泡巨噬细胞(AMs)，从而调节肺免疫反应。研究人员首先鉴定了吸入EXOs的受体细胞，并用PKH26标记，发现只有肺巨噬细胞在体内有效地吸收气管内灌注的EXOs。利用改良的氯化钙介导的转化，利用血清来源的EXOs来传递小RNA分子（包括siRNA、miRNA模拟物和miRNA抑制剂）。通过气管内滴注，成功地将siRNA和miRNA模拟物或抑制剂以血清衍生的EXOs为载体输送到肺巨噬细胞中，发现其在lps诱导的肺部炎症中起作用。该研究开发了一种新的方案，可以使用血清衍生的EXOs将指定的小RNA分子传递到体内的肺巨噬细胞中，能为肺部疾病的基因治疗提供新的启示。
简而言之，本研究的主要内容有：
1、 小鼠血清exo的鉴定
2、 血清exo对原发性AMs的影响
3、 AMs有效吸收血清exo
4、 利用血清exo传递siRNA
5、 通过血清exo递送miRNA模拟物或抑制剂
