01
引物设计
1．引物的设计的重要性
整个荧光定量 PCR 实验设计中，引物的设计是实验成功的关键因素，很大程度决定了检测的灵敏度和准确性。使用不合适的PCR引物容易导致实验失败：表现为扩增出目的带之外的多条带，不出带或出带很弱，等等。
引物设计的原则：
2．引物设计的具体操作
首先，百度搜索NCBI，进入官网
然后选择Gene数据库，输入基因的名字。比如：ZO－1点击Search
接下来，会跳转到这个页面
PS：同一种基因别称可能对应不同的基因ID，同学们要注意基因的种属，是人还是鼠，还是其他。找到自己要找的，点击它对应的ID（红色箭头位置）
然后，会跳转到一个介绍这种基因详细情况的页面
往下拉，可以看到这个基因可能存在几种转录本PS：（NM开头的就是mRNA，其他暂时别管）
以第一个转录本为例，点击NM＿001301025．3那个超链接，进入下面这个页面
往下拉，找到CDS区，之后点击FASTA
然后出现这个界面，点击Pick Primer进行引物设计
接下来进入设计界面，点击Get Primers，就会得到引物的序列
因为需要计算一段时间，所以可能要在这个界面等一会儿
然后进入下面这个界面，根据引物的设计原则就可以挑选你想要的的引物去合成了
PS：一般来说引物的是按照评分排列的，越靠前越好
对于只有一个转录本的基因，引物就这样设计，但是ZO－1有多个转录本怎么办？下面用一组图解释一下
引物－BLAST
一般来说，在引物送去合成时，首先要对引物的特异性进行评价。不过，这种在线设计的引物已经不需要再去BLAST了。
假如你有一对未知的引物，可以按照以下方法进行评价。
进入NCBI首页，点击BLAST
然后点击Primer－BLAST
进入之后就是设计引物的界面
最后点击Get Primers
02
GeneCards数据库
接下来，再给大家安利一个强大的数据库：GeneCards数据库
GeneCards基本覆盖了几大数据库对于基因的分析数据，是人类基因的综合数据库。
GeneCards提供简明的基因组，蛋白质组，转录，遗传和功能上所有已知和预测的人类基因。
GeneCards中的信息功能信息包括指向疾病的关系，突变和多态性，基因表达，基因功能，途径，蛋白质与蛋白质相互作用，相关的药物及化合物和切割等先进的研究抗体的试剂和工具等，重组蛋白，克隆，表达分析和RNAi试剂等。（还有各种数据库ID相互转换）
所以说，查看目标基因的汇总信息，便捷途径是上Gene Cards
下面放一些图简单介绍一下这个数据库的一些功能（这个数据库功能十分强大，大家有兴趣请自己摸索）
